對(duì)于科研人員來(lái)說(shuō)小鼠ELISA試劑盒原理和操作步驟并不陌生,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,操作過(guò)程中夾雜著洗滌和封閉步驟。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果操作不合理,也會(huì)很大程度上影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)我們是否能獲得有意義而且準(zhǔn)確的信息,這在很大程度上取決于操作結(jié)果的正確與否。
小鼠ELISA試劑盒使用方法:
1、血清:操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
在做小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)洗滌很重要:
洗滌步驟看似很簡(jiǎn)單無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,就會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,ELISA試劑盒懷疑洗滌不夠,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
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