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現(xiàn)將ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中注意事項(xiàng)總結(jié)如下
更新時(shí)間:2015-01-04   點(diǎn)擊次數(shù):949次

     我們必須對(duì)影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識(shí)。的 試劑 ,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意,就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽(yáng)性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高)是各個(gè)廠家洗板機(jī)調(diào)試中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。以期給大家?guī)?lái)一些啟發(fā),以改善洗板機(jī)的安裝調(diào)試水平,提高臨床檢測(cè)質(zhì)量。也有廠家堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度,科學(xué)地對(duì)待反應(yīng)結(jié)果?;蚬こ炭乖^合成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來(lái)講,*代產(chǎn)品為合成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是當(dāng)時(shí)的基因工程抗原不全,僅包括了HCV 的核心區(qū)片段;第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原,而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代 試劑 的敏感度大大提高了。

基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別如下:

1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。

(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。

(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。ELISA試劑盒標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。

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